色譜柱的清洗

要定期清洗色譜柱，清洗的頻次取決于樣品的純度。使用過(guò)程中，偶爾有一些樣品是會(huì)吸附于柱內(nèi)填充物上的。如果您正在使用的色譜柱，其某個(gè)性能指標(biāo)（如：不對(duì)稱因子、保留時(shí)間、理論塔板數(shù)或者分離度）發(fā)生10%或更大的變化時(shí)，請(qǐng)一定要注意清洗您的色譜柱。

各種TSK-GEL色譜柱都附帶了驗(yàn)收?qǐng)?bào)告單和操作條件與規(guī)格說(shuō)明書(shū)。驗(yàn)收?qǐng)?bào)告單上給出了用于色譜柱性能驗(yàn)收的測(cè)試方法；操作條件和規(guī)格說(shuō)明書(shū)中給出了色譜柱的使用說(shuō)明。使用驗(yàn)收?qǐng)?bào)告單中所列舉的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行柱性能的測(cè)試，并計(jì)算樣品中的某個(gè)組分或多個(gè)組分的不對(duì)稱因子、理論塔板數(shù)和分離度。請(qǐng)留心樣品的保留時(shí)間，因?yàn)槠鋾?huì)成為今后進(jìn)行比對(duì)的參照基準(zhǔn)。

清洗所有類(lèi)型的TSK-GEL液相色譜柱的基本原則

1. 按照相反的流動(dòng)方向進(jìn)行色譜柱的清洗。

2. 不要將色譜柱與檢測(cè)器連接。

3. 流速選擇為最大流速的一半，并切實(shí)進(jìn)行柱壓的監(jiān)控。

4. 如果您打算使用pH值較高或者較低的溶液進(jìn)行柱清洗的話，一定要確認(rèn)您所使用的色譜系統(tǒng)的其它部分（如：泵、泵的密封圈、進(jìn)樣器等等）是否適合。

5. 使用至少5個(gè)色譜柱體積（5CV）的各種清洗溶液進(jìn)行清洗，各個(gè)清洗步驟之間一定要使用5個(gè)柱體積的超純水進(jìn)行沖洗。

6. 使用您正使用的實(shí)驗(yàn)方案中的5個(gè)柱體積的流動(dòng)相進(jìn)行柱子的平衡。

我們?cè)谙旅娴膬?nèi)容以及操作條件和規(guī)格說(shuō)明書(shū)中推薦了適合各種類(lèi)型的TSK-GEL液相色譜柱使用的清洗溶液，您可以根據(jù)柱子和樣品的種類(lèi)進(jìn)行選擇。一般來(lái)說(shuō)，低pH值的鹽溶液能夠清洗堿性蛋白；有機(jī)溶劑能夠清洗疏水性蛋白；尿素、界面活性劑等能夠清洗強(qiáng)吸附物質(zhì)。

清洗溶液

SW&SW_XL系列色譜柱

1. PH較低（如：pH 3.0）、濃度較高的鹽溶液（如：0.5MNa₂SO₄）；

2. 添加水溶性有機(jī)物（MeOH、ACN、EtOH，10% -20%）的極性緩沖液；

3. SDS（0.1%）、尿素（8M）或胍（6M）的緩沖溶液。注意：這些試劑很難被去除。它們需要使用20-40個(gè)柱體積的20% ACN進(jìn)行沖洗。因此，只有當(dāng)先前的清洗方法無(wú)效時(shí)才選擇使用本方法。

PW&PW_XL系列色譜柱

1. 高鹽極性緩沖液（如：0.5M-1.0MNa₂SO₄）；

2. pH較低（如：2-3）或較高（如：11-12）的緩沖溶液 ；

3. 添加水溶性有機(jī)物（MeOH、ACN、EtOH，10% -20%）的極性緩沖液；

4. SDS（0.1%）、尿素（8M）或胍（6M）的緩沖溶液。注意：這些試劑很難被去除。

SW類(lèi)離子交換系列色譜柱

1. 高鹽極性緩沖液（如：0.5M-1.0MNa₂SO₄）；

2. 較低pH值（如：2-3）的緩沖溶液；

3. 添加水溶性有機(jī)物（MeOH、ACN、EtOH，10% -20%）的極性緩沖液；

4. 添加尿素（8M）或非離子性表面活性劑的緩沖溶液。注意：這些試劑很難被去除。

PW類(lèi)離子交換系列色譜柱

1. 使用0.1M-0.2M的NaOH，每次進(jìn)液250μL直至1個(gè)柱體積。對(duì)于半制備柱，則需要成比例增加進(jìn)液量；

2. 使用20%-40% 的水溶性乙酸*；（由于酸可以使蛋白質(zhì)沉淀，因此在其它清洗方法已試用之后再使用本方法。）

3. 添加水溶性有機(jī)物（MeOH、ACN、EtOH，10% -20%）的極性緩沖液；

4. 添加尿素（8M）或非離子性表面活性劑的緩沖溶液。注意：這些試劑很難被去除。

注意：在使用上樣緩沖液進(jìn)行平衡前，需使用5個(gè)柱體積的合適的溶液沖洗離子交換色譜柱，以恢復(fù)其正確的離子帶電性。

PW類(lèi)疏水反應(yīng)色譜柱

1. 使用0.1M-0.2M的NaOH，每次進(jìn)液250μL直至1個(gè)柱體積。對(duì)于半制備柱，則需要成比例增加進(jìn)液量；

2. 使用20%-40% 的水溶性乙酸*。（由于酸可以使蛋白質(zhì)沉淀，因此在其它清洗方法已試用之后再使用本方法。）

SW類(lèi)反相色譜柱

1. 100%乙腈或者乙醇；

2. 使用添加了0.05%TFA的10%-100% 的乙腈溶液進(jìn)行梯度清洗。

PW類(lèi)反相色譜柱

1. 100%乙腈或者乙醇；

2. 使用0.1M-0.2M的NaOH，每次進(jìn)液250μL直至1個(gè)柱體積。對(duì)于半制備柱，則需要成比例增加進(jìn)液量；

3. 使用20%-40% 的水溶性乙酸*。（由于酸可以使蛋白質(zhì)沉淀，因此在其它清洗方法已試用之后再使用本方法。）

SW類(lèi)正相柱

1. 水；

2. 45%乙腈或者丙酮；

3. 含有0.1%三乙胺、濃度不低于75%的乙腈溶液；

4. 含有50%乙腈、pH值為6.0的50mM磷酸鹽緩沖液。

PW類(lèi)親和色譜柱

參考隨色譜柱附帶的操作條件和規(guī)格說(shuō)明書(shū)進(jìn)行特殊類(lèi)型色譜柱的清洗。